北京莱普特PCR扩增仪的使用

　　导读：北京莱普特PCR扩增仪被广泛地应用在医学和生物学的实验室，例如用于判断检体中是不是会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制，以及亲子鉴定。知晓北京莱普特PCR扩增仪的使用原理才能更好的操作它。

　　北京莱普特PCR扩增仪的工作原理

　　类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

　　PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：

　　①模板DNA的变性：模板DNA经加热至9 ℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增构成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

　　②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

　　③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸3进程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2——4分钟，2—— 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期（Plateau）所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。

　　北京莱普特PCR扩增仪操作步骤

　　1. 在0.2mlEppendorf管内配制反应体系：

　　2. 打开电源开关

　　. 选择new进入编程操作

　　4. 按以下程序进行编程： （1） 94℃预变性5min；（2） 94℃变性50sec； （2） 55℃退火50sec；（4） 72℃延伸10 sec；

　　5. （5）重复步骤②-④ 0次；（6） 72℃彻底延伸10min

　　6. 从file菜单中，调取程序；

　　7. 按回车键确认后，按照提示输入相应的配制反应体系体系；

　　8. 启动程序；

　　9. 程序结束后，取出Eppendorf管。

　　10. 电泳检测PCR结果。

　　北京莱普特PCR扩增仪保养

　　1．样品池的清洗先打开盖子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡样品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液体，用棉签吸干剩余液体；打开PCR仪，设定保持温度为50℃的PCR程序并使之运行，让残余液体挥发去除。一般5——10min即可。

　　2．热盖的清洗对荧光定量PCR仪，当有荧光污染出现，而且这1污染并非来自样品池时，或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时，需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面，确保样品池的孔干净，无污物阻挡光路。

　　．仪器外表面的清洗清洗仪器的外表面可以除去灰尘和油脂，但达不到消毒的效果。选择没有腐蚀性的清洗剂对PCR仪的外表面进行清洗。

　　4．更换保险丝先将PCR仪关机，拔去插头，打开电源插口旁边的保险盒，换上备用的保险丝，视察是否恢复正常。